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dc.contributor.advisorGallois, Bernard
dc.contributor.authorMAUGE, Chloé
dc.contributor.otherSchmitter, Jean-Marie
dc.contributor.otherChaudière, Jean
dc.contributor.otherCharlier, Laurent
dc.date2010-07-01
dc.date.accessioned2020-12-14T21:13:20Z
dc.date.available2020-12-14T21:13:20Z
dc.identifier.urihttp://ori-oai.u-bordeaux1.fr/pdf/2010/MAUGE_CHLOE_2010.pdf
dc.identifier.urihttps://oskar-bordeaux.fr/handle/20.500.12278/22092
dc.identifier.nnt2010BOR14046
dc.description.abstractLes flavan-3-ols et leurs polymères, les proanthocyanidines, appartiennent à une famille de flavonoïdes appelée les tannins condensés. Ces composés polyphénoliques jouent un rôle essentiel dans la qualité phytosanitaire des baies de raisin ainsi que dans les propriétés organoleptiques du vin (flaveur, astringence et couleur). La connaissance des mécanismes qui régissent leur biosynthèse est donc primordiale afin de mieux comprendre la mise en place de la typicité d’un vin. Ce mémoire est consacré à l’étude de l’une des enzymes responsables de la synthèse des flavan-3-ols : la leucoanthocyanidine réductase 1 de Vitis vinifera (VvLAR1). Dans une première partie, nous décrivons les conditions d’expression, de purification et de stabilité de l’enzyme recombinante. L’activité enzymatique est démontrée et la configuration 2R,3S des produits réactionnels caractérisée. La seconde partie de ce manuscrit décrit l’étude structurale de l’enzyme. Des monocristaux d’apoenzyme, de complexes binaires (VvLAR1 / NADPH) et d’un complexe ternaire (VvLAR1 / NADPH / (+)-catéchine) ont été obtenus. Les différentes structures permettent de décrire les modifications structurales associées à la fixation du coenzyme puis du produit. Un mécanisme catalytique basé sur les interactions intermoléculaires observées au sein du complexe ternaire est proposé. La troisième partie de ce mémoire est consacrée à la recherche de conditions expérimentales permettant la production et la stabilisation de la leucocyanidine en solution, un des substrats naturels de l’enzyme. Les résultats obtenus permettent une première approche de l’étude des propriétés cinétiques de la VvLAR1.
dc.description.abstractEnFlavan-3-ols and their polymerisation products, proanthocyanidins, belong to a flavonoid family named condensed tannins. These polyphenolic compounds play a major role in the protection of grape berries to intruders and in the organoleptic properties of wine (flavour, astringency and colour). Knowledge of the mechanisms which govern their biosynthesis is thus essential to better understand wine typical composition. The present thesis is devoted to the investigation of one of the two enzymes which catalyse the flavan-3-ols formation: leucoanthocyanidin reductase 1 from Vitis vinifera (VvLAR1). In the first part of the manuscript, we describe the expression, purification and stability conditions of the recombinant enzyme. The enzyme activity is demonstrated and the reaction product 2R,3S configuration is characterised. The second part of this report describes the structural studies of the enzyme. Monocrystals of the apoenzyme and of binaries (VvLAR1 / NADPH) and a ternary (VvLAR1 / NADPH / (+)-catechin) complexes were obtained. These different structures allow the description of the structural changes associated with the coenzyme and then the substrate binding. A catalytic mechanism, based on the intermolecular interactions within the ternary complex, is proposed. The last part of the work is devoted to the investigation of the experimental conditions leading to the stability of leucocyanidin in solution, one of the natural substrates of the enzyme. The results obtained allow a first study of the VvLAR1 kinetic properties.
dc.language.isofr
dc.subjectVitis vinifera
dc.subject2R,3S-flavan-3-ols
dc.subjectLeucoanthocyanidine réductase
dc.subjectStructure 3D par diffraction des rayons X
dc.subjectMécanisme catalytique
dc.subjectStabilité du substrat
dc.subjectCinétique enzymatique
dc.subject.enVitis vinifera
dc.subject.en2R,3S-flavan-3-ols
dc.subject.enLeucoanthocyanidin reductase
dc.subject.enX-Ray diffraction 3D structure
dc.subject.enCatalytic mechanism
dc.subject.enSubstrate stability
dc.subject.enKinetics of the reaction
dc.titleBiosynthèse des flavan-3-ols chez Vitis vinifera : structure, mécanisme catalytique et première approche cinétique de la leucoanthocyanidine réductase
dc.typeThèses de doctorat
bordeaux.hal.laboratoriesThèses de l'Université de Bordeaux avant 2014*
bordeaux.hal.laboratoriesChimie et Biologie des Membranes et des Nanoobjets (Bordeaux)
bordeaux.institutionUniversité de Bordeaux
bordeaux.institutionBordeaux INP
bordeaux.type.institutionBordeaux 1
bordeaux.thesis.disciplineBiochimie
bordeaux.ecole.doctoraleÉcole doctorale Sciences de la vie et de la santé (Bordeaux)
star.origin.linkhttps://www.theses.fr/2010BOR14046
dc.contributor.rapporteurDangles, Olivier
dc.contributor.rapporteurMourey, Lionel
bordeaux.COinSctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:journal&rft.title=Biosynth%C3%A8se%20des%20flavan-3-ols%20chez%20Vitis%20vinifera%20:%20structure,%20m%C3%A9canisme%20catalytique%20et%20premi%C3%A8re%20approche%20cin%C3%A9tique%20de%20la&rft.atitle=Biosynth%C3%A8se%20des%20flavan-3-ols%20chez%20Vitis%20vinifera%20:%20structure,%20m%C3%A9canisme%20catalytique%20et%20premi%C3%A8re%20approche%20cin%C3%A9tique%20de%20l&rft.au=MAUGE,%20Chlo%C3%A9&rft.genre=unknown


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