Implication de la protéase de l'Adénovirus dans le désassemblage partiel de la capside et le relargage de la protéine VI
Langue
en
Thèses de doctorat
Date de soutenance
2023-07-25Spécialité
Microbiologie - immunologie
École doctorale
École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Bordeaux)Résumé
L’Adénovirus est un virus non-enveloppé qui entre dans les cellules par endocytose après reconnaissance aux récepteurs cellulaires. Pendant cette étape d’entrée, la capside subit un désassemblage partiel à l’intérieur de ...Lire la suite >
L’Adénovirus est un virus non-enveloppé qui entre dans les cellules par endocytose après reconnaissance aux récepteurs cellulaires. Pendant cette étape d’entrée, la capside subit un désassemblage partiel à l’intérieur de l’endosome qui permet la libération de la protéine VI. Cette protéine est responsable de la lyse de la membrane de l’endosome, permettant ainsi à la capside de s’échapper de l’endosome pour accéder au cytosol et être transportée vers l’enveloppe nucléaire via les microtubules. Les mécanismes cellulaires et / ou viraux permettant ce désassemblage partiel ne sont pas entièrement compris. Le projet vise à investiguer le rôle potentiel de la protéase de l’Adénovirus (AVP) dans cette étape d’entrée. L’AVP est une protéase à cystéine produite dans une forme inactive et incorporée dans les capsides comme une protéine de liaison à l’ADN, indépendamment de sa séquence. Une fois activée par deux cofacteurs, elle permet le clivage de différentes protéines via une réaction biochimique à une dimension. Cette étape, appelée maturation, se produit suite à / pendant l’assemblage de la capside dans la cellule infectée et rend la capside moins stable, ce qui est essentiel pour l’infectivité du virus. Un mutant de l’Adénovirus qui n’incorpore pas l‘AVP est donc composé de protéines non clivées et possède par conséquent une capside hyperstable. Ce mutant est ainsi incapable de libérer la protéine VI dans l’endosome et est dégradé par la voie lysosomale. Nous avons produit et purifié l’AVP afin de développer un test de maturation in vitro des protéines virales et apporter une meilleure compréhension de son rôle potentiel dans le désassemblage partiel de la capside. Nous avons identifié un nouveau site de clivage fonctionnel d’une protéine de la capside qui pourrait être un des déclencheurs de la libération de la protéine VI. Nous combinons des approches de biochimie et de biologie cellulaire afin de confirmer que l’activité de clivage de l’AVP facilite l’entrée du virus.< Réduire
Résumé en anglais
The Adenovirus is a non-enveloped virus entering the cells by endocytosis after attachment to cell receptors. During entry, the capsid undergoes a partial disassembly inside the endosome, which is allowing the release of ...Lire la suite >
The Adenovirus is a non-enveloped virus entering the cells by endocytosis after attachment to cell receptors. During entry, the capsid undergoes a partial disassembly inside the endosome, which is allowing the release of protein VI. This protein is responsible for the endosomal membrane damages that allow the capsid to escape the endosome to access the cytoplasm, to follow nuclear transport mediated by microtubules. The cellular and / or viral cues allowing this intra-endosomal disassembly are not fully understood. The project goal is to investigate the potential role of the Adenovirus protease (AVP) in this entry step. The AVP is produced as an inactive cysteine protease and is incorporated in the capsids as an unspecific DNA sequence binding protein. Once activated by two co-factors, it allows the cleavage of multiple proteins through a one dimensional biochemical reaction. This step, called maturation, is happening after / during the assembly of the capsids in the infected cell. It destabilizes the capsid, which is essential for the virus infectivity. An Adenovirus mutant, which is not incorporating the AVP, is composed of unprocessed proteins and thus, possesses a hyperstable capsid. Therefore, this mutant cannot release the protein VI in the endosome and thus, is degraded via the lysosomal pathway. We produced and purified the AVP to develop an in vitro maturation assay of the viral proteins, and bring a better understanding of its potential role in the partial disassembly of the capsid. We identified a new functional cleavage site of a capsid protein which could be one of the triggers of the protein VI release. We combined biochemical and cell biology approaches to confirm that the cleavage activity of the AVP is facilitating the virus entry.< Réduire
Mots clés
Adénovirus
Capside
Protéase virale
Interactions protéine-Protéine
Dommages membranaires
Mots clés en anglais
Adenovirus
Capsid
Viral protease
Protein-Protein interaction
Membrane damage
Origine
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