Développement d’une méthode d’analyse du prothioconazole par LC-MS/MS pour les mesures d’exposition des agriculteurs utilisateurs de semences enrobées

Abstract

Une méthode de dosage du prothioconazole (PTC) et de son métabolite principal, le desthio-prothioconazole (DPTC), par LC-MS/MS a été mise au point par LABÉO dans le cadre d’un projet collaboratif sur les mesures d’exposition des agriculteurs aux pesticides lors de la manipulation de semences enrobées. Le projet Pestexpo semis maïs est une étude d’exposition en milieu agricole qui consiste à suivre les différentes tâches de travail effectuées lors du semis de maïs avec des semences enrobées de pesticides et de déterminer le niveau d’exposition cutané et respiratoire des utilisateurs. En effet, très peu d’études ont été réalisées sur l’exposition des agriculteurs lors de cette activité, il convient donc d’apporter des données dans des conditions réelles de travail. Afin de mesurer les niveaux d’expositions, les agriculteurs sont équipés de gants en coton, de patchs en coton disposés sur différentes parties du corps et de pompes d’échantillonnage équipées de filtre XAD2. Des frottis sont également effectués avec des patchs sur le matériel avant et après utilisation. Parmi les matières actives utilisées dans l’enrobage de semences de maïs, on trouve le prothioconazole qui est une molécule qui peut être dégradée assez rapidement en desthio-prothioconazole. Pour mesurer les résidus de pesticides, LABÉO a donc développé une méthode d’extraction et d’analyse par LC-MS/MS du prothioconazole et du desthio-prothioconazole sur les différentes matrices utilisées (patchs, gants, filtres XAD2). L’objectif était de mettre en oeuvre une méthode permettant de doser les deux molécules dans une même analyse, d’atteindre une limite de quantification la plus basse possible afin de détecter des concentrations potentiellement très faibles, mais aussi qu’elle soit simple et rapide en raison du nombre important d’échantillons à traiter. Les pesticides (prothioconazole et desthio-prothioconazole) présents sur les patchs, frottis, gants et filtres XAD2 sont extraits par agitation dans un solvant, en adaptant le solvant d’extraction en fonction de la matrice puis quantifiés par chromatographie liquide ultra-haute performance Agilent 1290 couplée à un spectromètre de masse triple quadripôle 6495 avec une source AJS ESI. L’analyse LC-MS/MS est réalisée en injection directe de 5 μL de l’extrait. La séparation est effectuée avec une colonne Zorbax Eclipse Plus C18 de 1.8μm-50mmx2.1mm, avec un gradient de 10 min en eau ultra-pure et acétonitrile acidifié. Les temps de rétention sont de 4.5 min et 4.9 min, respectivement pour le DPTC et le PTC. Les échantillons sont quantifiés avec 2 transitions MRM en mode positif en étalonnage interne avec le métolachlore d6. La validation de la méthode des résidus de pesticides a été réalisée selon le référentiel NF T90-210 avec une limite de quantification en prothioconazole et en desthio-prothioconazole de 20 ng/patch, 40 ng/gant et 2.5 ng/filtre. L’étude de stabilité des contrôles dopés et congelés confirme l’intérêt de doser simultanément le desthio-prothioconazole et le prothioconazole. Cinq cents échantillons ont été analysés, en provenance de 17 exploitations de la région normande. Les résultats obtenus montrent qu’en général les agriculteurs sont plus exposés pendant l’étape de préparation du semis et notamment sur les parties inférieures du corps et les gants. L’étape de pliage des sacs de semence a montré une forte contamination qui pourra être améliorée par des actions de formations auprès des professionnels.