Protocole de marquage à l’azote 15N de fruits de tomate issus de plantes cultivées en condition standard

Abstract

Estimer la stabilité des protéines dans un tissu végétal est une question essentielle mais complexe. Aujourd’hui, il n’existe que très peu de travaux montrant la faisabilité de mesurer le turnover d’un large panel de protéines végétales. Aussi, nous avons tenté d’incorporer l’azote 15N dans le péricarpe de fruit de tomate en ajoutant 5 % de Ca (15NO 3)2 à la solution nutritive classiquement utilisée. Au bout d’un mois de culture avec notation d’anthèses, quatre cinétiques d’incorporation ont été réalisées sur des fruits à différents stades de développement. Démarrées simultanément, elles ont duré 11 jours. Le dosage des rapports isotopiques réalisés par EA-IRMS (Elementary Analysis - Isotopic Ratio by Mass Spectrometry) sur résidus insolubles après extraction hydro-alcoolique rend compte d’une bonne incorporation du marquage. Associés au dosage des protéines totales (Bradford), les résultats obtenus révèlent la très bonne linéarité de l’incorporation de l’azote 15N dans le péricarpe de tomate en phase d’expansion cellulaire