L'épigénétique comme modulateur de l'expression de hTERT dans les lymphomes T cutanés

Abstract

Les lymphomes T-cutanés (CTCL) sont des tumeurs télomérase-positives exprimant hTERT, dans lesquelles ni l'amplification, ni les réarrangements, ni les mutations hotspots du promoteur peuvent expliquer la ré-expression du gène. Comme le promoteur de hTERT est riche en CpG, nous avons étudié la contribution des mécanismes épigénétiques dans sa ré-expression, puisqu’aucune étude à ce jour n’a été rapporté dans les CTCL. Nous avons analysé le statut de méthylation du promoteur de hTERT dans des lignées cellulaires, des cellules de patients ainsi que dans des cellules issues de donneurs sains. Nous avons également étudié la présence sur le promoteur de hTERT des histones H3K27ac et H3K27me3. Les analyses de méthylation spécifiques des cellules CTCL ont révélé un profil de méthylation caractéristique limité aux cellules tumorales, englobant une région distale hyperméthylée de -650 pb à -150 pb et une région proximale hypométhylée de -150 pb à + 150 pb, à partir du TSS. Ce double profil de méthylation observé sur le promoteur de hTERT est identique à celui observé dans d’autres types de tumeurs. La région distale hyperméthylée identifiée dans les cellules tumorales CTCL correspond à la région nommée récemment « région TERT oncogénique hyperméthylée » (THOR) et qui est rapportée associée à la réactivation de la télomérase dans les tumeurs, mais jusqu'à présent non rapportée dans les lymphomes. Nous avons évalué l'effet sur THOR de deux inhibiteurs d’histone désacétylases (HDACi), la romidepsine et le vorinostat, tous deux approuvés pour le traitement des CTCL ainsi que d'un inhibiteur de l'ADN méthyltransférase (DNMTi) 5-azacytidine, non approuvé pour les CTCL. Nos résultats obtenus à partir d’une cohorte limitée semblent suggérer, que la 5-azacytidine ne provoque pas la déméthylation de la région hyperméthylée du promoteur de hTERT alors que ce traitement s’accompagne d’une diminution de l’expression de hTERT et, fonctionnellement d’une baisse des capacités clonogènes des cellules. La romidepsine et le vorinostat modifient peu les marques d'histones H3K27ac et H3K27me3 présentes au niveau du promoteur hTERT. En conclusion, les résultats obtenus dans les cellules CTCL comparées à ceux de cellules saines confirment que la méthylation du promoteur de hTERT dans les cellules tumorales est particulière et spécifique à ces cellules, faisant de cette méthylation un biomarqueur de la cellule tumorale. De plus, ils révèlent que la méthylation du promoteur hTERT est relativement stable même sous la pression de thérapies épigénétiques, suggérant que la régulation de hTERT par ces thérapies s’opère en priorité de manière indirecte.