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dc.contributor.advisorGaudin, Karen
dc.contributor.advisorFerey, Ludivine
dc.contributor.authorBARAKAT, Fatima
dc.contributor.otherGaudin, Karen
dc.contributor.otherFerey, Ludivine
dc.contributor.otherTaverna, Myriam
dc.contributor.otherCouderc, François
dc.contributor.otherGissot, Arnaud
dc.date2020-12-11
dc.identifier.urihttp://www.theses.fr/2020BORD0292/abes
dc.identifier.uri
dc.identifier.urihttps://tel.archives-ouvertes.fr/tel-03476073
dc.identifier.nnt2020BORD0292
dc.description.abstractLes oligonucléotides antisens (ASO) ont la capacité d’inhiber ou de moduler l’expression d’un gène cible par différents mécanismes. La bioconjugation de l’ASO avec un lipide est une approche très prometteuse qui a montré une amélioration de la délivrance de la séquence antisens et par conséquent, de l’efficacité thérapeutique de l’oligonucléotide. Ces nouveaux agents thérapeutiques, les oligonucléotides lipidiques (LON), sont des molécules amphiphiles capables de s’auto-assembler sous forme d’objets supramoléculaires. Leur développement pharmaceutique requiert des méthodes analytiques adaptées pour évaluer la pureté des LON synthétisés et pouvoir les quantifier dans les formulations mais aussi pour caractériser les assemblages supramoléculaires formés.Dans ce travail, différentes méthodes ont été évaluées en chromatographie liquide (HPLC) à polarité de phase inversée par appariement d’ions et à interactions hydrophiles, en électrophorèse capillaire (CE) et en chromatographie d’exclusion stérique (SEC) pour l’analyse de LON de structures chimiques variées. Malgré les nombreux paramètres étudiés, l’asymétrie des pics obtenus en HPLC, limite son utilisation à des fins de dosage. En revanche, une méthode quantitative a été développée et validée en CE en présence de cyclodextrines (CD). La constante de complexation entre le LON libre et les CD ainsi que la mobilité électrophorétique du complexe ont été déterminées. Enfin, le potentiel de la SEC et de la CE pour la caractérisation des objets supramoléculaires de LON a été évalué.
dc.description.abstractEnAntisense oligonucleotides (ASO) have the ability to inhibit or modulate the expression of a target gene by various mechanisms. Bioconjugation of ASO with a lipid is a very promising approach which has shown an improvement in the delivery of the antisense sequence and therefore, in the therapeutic efficacy of the oligonucleotide. These new therapeutic agents, lipid oligonucleotides (LON), are amphiphilic molecules and are able to self-assemble to form supramolecular objects. Their pharmaceutical development requires suitable analytical methods to study the purity of the LONs synthesized and to be able to quantify them in the formulations but also to characterize the supramolecular assemblies formed.In this work, different methods were investigated in ion-pairing reversed-phase HPLC and hydrophilic interaction chromatography, capillary electrophoresis (CE) and size exclusion chromatography (SEC) for LON analysis with various chemical structures. Despite the different parameters studied, the asymmetry of the peaks obtained by HPLC limits its use for assays. On the other hand, a quantitative method has been developed and validated in CE in the presence of cyclodextrins (CD). The complexation constant between free LON and CDs as well as the electrophoretic mobility of the complex were determined. Finally, the potential of SEC and CE for the characterization of supramolecular objects of LON was assessed.
dc.language.isofr
dc.subjectOligonucléotides lipidiques
dc.subjectChromatographie liquide
dc.subjectÉlectrophorèse capillaire
dc.subjectChromatographie d’exclusion stérique
dc.subjectAssemblages supramoléculaires
dc.subject.enLipid oligonucleotides
dc.subject.enLiquid chromatography
dc.subject.enCapillary electrophoresis
dc.subject.enSize exclusion chromatography
dc.subject.enSupramolecular assemblies
dc.titleDéveloppement de méthodes analytiques pour l’analyse d’oligonucléotides thérapeutiques bio-conjugués à des lipides
dc.title.enDevelopment of analytical methods for the analysis of therapeutic oligonucleotides bioconjugated to lipids
dc.typeThèses de doctorat
dc.contributor.jurypresidentPeyrin, Eric
bordeaux.hal.laboratoriesAcides Nucléiques : Régulations Naturelle et Artificielle
bordeaux.type.institutionBordeaux
bordeaux.thesis.disciplineChimie Analytique et Environnementale
bordeaux.ecole.doctoraleÉcole doctorale des sciences chimiques (Talence, Gironde)
star.origin.linkhttps://www.theses.fr/2020BORD0292
dc.contributor.rapporteurPeyrin, Eric
dc.contributor.rapporteurTaverna, Myriam
bordeaux.COinSctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:journal&rft.title=D%C3%A9veloppement%20de%20m%C3%A9thodes%20analytiques%20pour%20l%E2%80%99analyse%20d%E2%80%99oligonucl%C3%A9otides%20th%C3%A9rapeutiques%20bio-conjugu%C3%A9s%20%C3%A0%20d&rft.atitle=D%C3%A9veloppement%20de%20m%C3%A9thodes%20analytiques%20pour%20l%E2%80%99analyse%20d%E2%80%99oligonucl%C3%A9otides%20th%C3%A9rapeutiques%20bio-conjugu%C3%A9s%20%C3%A0%20&rft.au=BARAKAT,%20Fatima&rft.genre=unknown


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