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dc.contributor.advisorBrisson, Alain
dc.contributor.authorARRAUD, Nicolas
dc.date2011-12-19
dc.date.accessioned2020-12-14T21:16:34Z
dc.date.available2020-12-14T21:16:34Z
dc.identifier.urihttp://ori-oai.u-bordeaux1.fr/pdf/2011/ARRAUD_NICOLAS_2011.pdf
dc.identifier.urihttps://oskar-bordeaux.fr/handle/20.500.12278/22628
dc.identifier.nnt2011BOR14459
dc.description.abstractL’Annexine A5 (AnxA5) est une protéine soluble se liant aux membranes contenant de la phosphatidylsérine (PS) en présence de calcium (Ca2+). Le rôle central joué par l’AnxA5 dans les processus de réparation membranaire a été récemment mis en évidence. L’AnxA5 possède une très forte affinité pour les membranes biologiques contenant de la PS, cependant son mode de liaison aux membranes n’est pas encore élucidé.La première partie de mon travail de thèse a concerné le développement d’une approche originale d’étude de la liaison de l’AnxA5 à des microsphères de silice fonctionnalisées par une bicouche lipidique (µPSiO2@SLB pour supported lipid bilayer), par cytométrie en flux (FCM). Cette approche m’a permis d’étudier la liaison à l’équilibre et en cinétique à très faible concentration en AnxA5, de l’ordre du picomolaire. Cette approche représente une des méthodes les plus sensibles d’étude de liaison à l’équilibre et la première permettant d’accéder aux constantes cinétiques d’interaction pour l’AnxA5. Cette étude m’a également permis de mettre au point une stratégie de dosage indirect de liposomes contenant de la PS avec une sensibilité de l’ordre du nanogramme de lipides par millilitre.La seconde partie de ma thèse a concerné l’étude de microparticules (MP), fragments de membranes cellulaires présents dans les fluides biologiques. Dans le plasma sanguin la majorité des MP sont d’origine plaquettaire et exposent de la PS. Il existe une corrélation entre la concentration en MP plasmatiques exposant de la PS et le développement de pathologies thrombotiques. La FCM est la méthode de référence dans l’étude des MP cependant leur détection est rendue difficile par leur petite taille. J’ai appliqué aux MP plasmatiques le test de dosage développé pour les liposomes. Les résultats obtenus sont prometteurs et permettent d’envisager le développement d’un test de dosage de l’ensemble des MP exposant de la PS.
dc.description.abstractEnAnnexin-A5 (AnxA5) is a soluble membrane binding protein that binds to phosphatidylserine (PS) containing membranes in a calcium dependent manner and plays a central role in cell membrane repair processes. AnxA5 has a remarkably high affinity for PS containing membranes, but its binding mechanism remains unclear.The first part of my PhD work was to develop a new method for studying AnxA5 binding using supported lipid bilayer functionalized silica microspheres (µPSiO2@SLB) and Flow Cytometry (FCM). This approach allowed me to describe in details both equilibrium and kinetics of AnxA5 binding at picomolar concentrations in AnxA5. This study is one of the most sensitive for equilibrium binding studies and the first allowing to measure binding kinetics constants for AnxA5. This study also led to the development of a new strategy for determination of liposome concentration with sensitivity in the range of one nanogram of lipid per milliliter. The second part of my work focused on microparticles (MP) that are cell membrane fragments found in biological fluids. In plasma, the vast majority of MP originates from platelets and expresses PS at their surface. There is a correlation between MP concentration in plasma and thrombotic risk. FCM is the “golden standard” of hæmatologic analysis but the majority of MPs are too small to be detected. I have applied the test developed with liposomes for the quantification of MP. The results are promising and allow foreseeing the development of a test able to give the absolute quantity of PS exposing MPs in plasma samples.
dc.language.isofr
dc.subjectAnnexine A5
dc.subjectCinétique de liaison
dc.subjectCytométrie en flux
dc.subjectBicouche lipidique supportée
dc.subjectMicrosphères de silice
dc.subjectPhosphatidylsérine
dc.subjectMicroparticules plasmatiques
dc.subjectQuantification
dc.subject.enAnnexin A5
dc.subject.enBinding kinetics
dc.subject.enFlow cytometry
dc.subject.enSupported lipid bilayer
dc.subject.enSilica microspheres
dc.subject.enPhosphatidylserine
dc.subject.enPlasmatic microparticles
dc.subject.enQuantification
dc.titleEtude cinétique de la liaison élémentaire entre Annexine-A5 et membranes et mise au point d’un test de quantification des microparticules plasmatiques pro-coagulantes, par cytométrie en flux
dc.title.enKinetics of Annexin-A5 binding to model membranes studied by Flow Cytometry and development of a new method for quantifying Plasmatic Microparticles
dc.typeThèses de doctorat
dc.contributor.jurypresidentNurden, Alan T.
bordeaux.hal.laboratoriesThèses de l'Université de Bordeaux avant 2014*
bordeaux.hal.laboratoriesChimie et Biologie des Membranes et des Nanoobjets (Bordeaux)
bordeaux.institutionUniversité de Bordeaux
bordeaux.institutionBordeaux INP
bordeaux.type.institutionBordeaux 1
bordeaux.thesis.disciplineBiochimie
bordeaux.ecole.doctoraleÉcole doctorale Sciences de la vie et de la santé (Bordeaux)
star.origin.linkhttps://www.theses.fr/2011BOR14459
dc.contributor.rapporteurDignat-George, Françoise
dc.contributor.rapporteurAyala-Sanmartin, Jésus
bordeaux.COinSctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:journal&rft.title=Etude%20cin%C3%A9tique%20de%20la%20liaison%20%C3%A9l%C3%A9mentaire%20entre%20Annexine-A5%20et%20membranes%20et%20mise%20au%20point%20d%E2%80%99un%20test%20de%20quantifica&rft.atitle=Etude%20cin%C3%A9tique%20de%20la%20liaison%20%C3%A9l%C3%A9mentaire%20entre%20Annexine-A5%20et%20membranes%20et%20mise%20au%20point%20d%E2%80%99un%20test%20de%20quantific&rft.au=ARRAUD,%20Nicolas&rft.genre=unknown


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